p>Унифицированный метод       

по цветной реакции Яффе     


63 - 64    




Печень                            




цитохром P-450      


Спектрофотометрический    
  


82         




цитохром b5,        


Спектрофотометрический      



82         




N-деметилирование   
амидопирина         


Спектрофотометрический      



84         




O-деметилирования   
p-нитроанизола      


Спектрофотометрический      



85          




гидроксилирование   
3,4 бензпирена      


Спектрофлюориметрический    



86         




O-деэтилирование    
7-этоксикумарина    


Спектрофлюориметрический    



87         




O-деэтилирование    
7-этоксирезофурина  


Спектрофлюориметрический    



88          




бета-галактозидаза, 
бета-глюкуронидаза, 
арилсульфатазы A и B,
альфа-маннозидаза,  
бета-N-             
ацетилглюкозаминидаза


Спектрофотометрический,     

спектрофлюориметрический    


89         




эпоксидгидролаза    


Спектрофлюориметрический    



90         




УДР-                
глюкуронозилтрансфе-
раза                


Спектрофотометрический и    

спектрофлюориметрический    


91         




 

Гематологические
показатели

 

+----------------------------------------------------------------+

¦     Показатель     ¦             
Метод             ¦Литера-   ¦

¦                    ¦                                ¦турный    ¦

¦                    ¦                                ¦источник  ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦         1          ¦               
2               ¦    3    
¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦концентрация
гемог- ¦гемиглобинцианидный            
¦92        ¦

¦лобина              ¦                                ¦         
¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦общее
количество    ¦унифицированный
метод           ¦93        ¦

¦эритроцитов         ¦подсчета в счетной камере       ¦          ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦гематокритная       ¦унифицированный микрометод      ¦94        ¦

¦величина            ¦(модификация И. Тодорова)       ¦          ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦среднее
содержание  ¦расчетный                       ¦94        ¦

¦гемоглобина
в эрит- ¦      конц. гемоглобина г% x 10
¦          ¦

¦роците
(ССЭ) (пг)   ¦ССЭ =
------------------------- ¦          ¦

¦                    ¦         эритроцитыв. млн.      ¦          ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦средняя
концентрация¦расчетный                      
¦94        ¦

¦гемоглобина
в эрит- ¦      конц. гемоглобина г%      ¦          ¦

¦роците
(СКЭ) (%)    ¦СКЭ =
-------------------  x 100¦          ¦

¦                    ¦         гематокритн.           ¦          ¦

¦                    ¦         величина об%           ¦          ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦средний
объем одного¦расчетный                       ¦94        ¦

¦эритроцита
(СОЭ)    ¦      гематокритн. величина x 10¦          ¦

¦(мю)                ¦СОЭ =
--------------------------¦          ¦

¦                    ¦          эритроциты в млн.     ¦          ¦

+--------------------+--------------------------------+----------¦

¦общее
количество    ¦- унифицированный метод
под-    ¦94        ¦

¦лейкоцитов,
лейкоци-¦счета в счетной камере;        
¦          ¦

¦тарная
формула      ¦- унифицированный метод
мор-    ¦          ¦

¦                    ¦фологического исследования     
¦          ¦

¦                    ¦форменных элементов крови
с     ¦          ¦

¦                    ¦дифференцированным
подсчетом    ¦          ¦

¦                    ¦лейкоцитарной
формулы;          ¦          ¦

¦                    ¦- приготовление мазков крови    ¦         
¦

¦                    ¦унифицированным методом,
фик-   ¦          ¦

¦                    ¦сация и окраска мазков
унифи-   ¦          ¦

¦                    ¦цированным методом              ¦          ¦

+----------------------------------------------------------------+

 

Морфологические
исследования

 

Все животные, погибшие в
ходе эксперимента, вскрываются и составляется протокол вскрытия. На забое
проводятся морфологические исследования, изложенные в таблице.

 

+----------------------------------------------------------------+

¦Исследуемые
органы¦             Методы             ¦Литературный¦

¦                  ¦                                ¦ 
источник  ¦

+------------------+--------------------------------+------------¦

¦        1         ¦               
2               ¦     3     
¦

+------------------+--------------------------------+------------¦

¦все
внутренние    ¦макроскопические
исследования   ¦            ¦

¦органы            ¦при вскрытии на забое           ¦            ¦

+------------------+--------------------------------+------------¦

¦печень            ¦1. Обзорные гистологические     ¦95, 96, 97  ¦

¦почки             ¦исследования, окраска
срезов    ¦            ¦

¦селезенка         ¦органов, полученных с парафино-
¦            ¦

¦желудок           ¦вых блоков, гематоксилином и    ¦            ¦

¦тонкий
кишечник   ¦эозином                         ¦            ¦

¦семенники         ¦2. Дополнительные специальные   ¦            ¦

¦поджелудочная     ¦морфологические исследования:   ¦            ¦

¦железа            ¦- изучение жировых включений
в  ¦            ¦

¦сердце            ¦клетке, окраска суданом;        ¦            ¦

¦                  ¦- выявление жирных кислот
с     ¦            ¦

¦                  ¦помощью сульфата
нильского      ¦            ¦

¦                  ¦голубого;                       ¦            ¦

¦                  ¦- выявление
холестерина;        ¦            ¦

¦                  ¦- выявление в клетках РНК
окра- ¦            ¦

¦                  ¦шиванием пиронином и
метиловым  ¦            ¦

¦                  ¦зеленым;                        ¦            ¦

¦                  ¦- выявление липофусцина в
клет- ¦            ¦

¦                  ¦ках;                            ¦            ¦

¦                  ¦- выявление коллагеновых
волокон¦            ¦

¦                  ¦в соединительной
ткани;         ¦            ¦

¦                  ¦- выявление эластических
волокон¦            ¦

¦                  ¦в соединительной
ткани;         ¦            ¦

¦                  ¦- морфометрический метод
иссле- ¦            ¦

¦                  ¦дований размеров площади
гисто- ¦            ¦

¦                  ¦логических структур и их
колеба-¦            ¦

¦                  ¦ний в патологии                 ¦           
¦

+----------------------------------------------------------------+

 

7.4.
Специальные методы исследования

 

Необходимость проведения
тех или иных специальных методов исследования определяется экспертом Института
питания РАМН.

 

7.4.1.
Изучение влияния продуктов,

полученных
из генетически модифицированных источников,

на функцию
воспроизводства с выявлением возможного

эмбриотоксического,
гонадотоксического

и
тератогенного действия

 

Условия проведения
эксперимента

 

Исследования проводятся
на белых линейных крысах. Животные разбиваются на 3 группы, в каждой группе 10
самцов и 25 самок. Исходная масса самок не менее 180 г, исходная масса самцов
не менее 200 г. 1-ая контрольная группа крыс (самцы и самки) получает на
протяжении всего эксперимента общевиварный или полусинтетический рацион (см. п.
7.3); 2-ая контрольная группа (самцы и самки) получает общевиварный или
полусинтетический рацион с включением исследуемого продукта, полученного
традиционным способом в агравированном количестве; опытная группа крыс (самцы и
самки) получает общевиварный или полусинтетический рацион с включением
аналогичного продукта, полученного из генетически модифицированных источников в
том же количестве, что и крысы 2-ой контрольной группы. Животные находятся на
этих рационах 30 дней до спаривания, во время спаривания, беременности,
лактации. Полученное потомство находится на этих рационах до момента половой
зрелости. Исследуются 5 поколений крыс.

 

Изучение
влияния продукта, полученного из генетически

модифицированных
источников, на пренатальное развитие

потомства

 

Для спаривания в клетку к
двум самкам подсаживают вечером одного самца, утром осуществляют
микроскопирование влагалищных мазков. Первый день беременности определяют по
наличию сперматозоидов во влагалищных мазках. По 10 беременных самок из каждой
группы забивают на 20-ый день беременности. Плоды извлекают из рогов матки и
обследуют визуально для обнаружения видимых аномалий развития, после этого
плоды взвешивают. После наружного осмотра плоды каждого помета делят на 2
группы. Одну фиксируют в жидкости Буэна и используют для изучения внутренних
органов. Другую фиксируют в 96-процентном этаноле и используют для изучения
состояния скелета (2 - 3 плода от приплода) [98]. Подсчитывают количество
желтых тел, количество живых эмбрионов, количество погибших эмбрионов (мест
резорбции). Вычисляют общую эмбриональную смертность, смертность эмбрионов до и
после имплантации [99].

 

Изучение
влияния продукта, полученного из генетически

модифицированных
источников, на постнатальное развитие

потомства

 

По 15 беременных самок в
каждой группе оставляют до родов и проводят изучение потомства: количество
крысят, родившихся у одной самки, их внешний вид, фиксируют количество
мертворожденных животных, потомство взвешивают при рождении, затем еженедельно.
Учитывают следующие показатели физиологического развития крысят: сроки
отлипания ушных раковин, открытия глаз, прорезы